Helicase-dependent Amplification

Die (HDA, engl. für ‚Helikase-abhängige Amplifikation‘) ist eine Methode zur Amplifikation (Vervielfältigung) von DNA. Sie ist eine Variante der isothermalen DNA-Amplifikation.<ref name="PMID 15247927">M. Vincent, Y. Xu, H. Kong: helicase-dependent isothermal DNA amplification. In: EMBO reports. Band 5, Nummer 8, August 2004, ISSN 1469-221X, S. 795–800, doi:10.1038/sj.embor.7400200, PMID 15247927, PMC 1249482 (freier Volltext).</ref>

Eigenschaften

Die recombinase polymerase amplification verwendet eine Helikase (TteUvrD, Helikase-Superfamilie II, aus Thermoanaerobacter tengcongensis, jetzt Unterart von Caldanaerobacter subterraneus<ref name="Fardeau2004"/>),<ref>Y. Cao, H. J. Kim, Y. Li, H. Kong, B. Lemieux: Helicase-dependent amplification of nucleic acids. In: Frederick M. Ausubel et al. (Hrsg.): Current protocols in molecular biology Band 104, 2013, ISSN 1934-3647, S. Unit 15.11, doi:10.1002/0471142727.mb1511s104, PMID 24510297.</ref> ein Einzelstrang-bindendes Protein und eine strangversetzende DNA-Polymerase.<ref>J. Kim, C. J. Easley: Isothermal DNA amplification in bioanalysis: strategies and applications. In: Bioanalysis. Band 3, r. 2, Januar 2011, ISSN 1757-6199, S. 227–239, doi:10.4155/bio.10.172, PMID 21250850.</ref> Durch die Verwendung einer strangversetzenden DNA-Polymerase kann die Reaktion bei einer konstanten Temperatur von 37 bis 42 °C erfolgen, bei Raumtemperatur verläuft die Reaktion etwas langsamer.<ref>L. Lillis, D. Lehman, M. C. Singhal, J. Cantera, J. Singleton, P. Labarre, A. Toyama, O. Piepenburg, M. Parker, R. Wood, J. Overbaugh, D. S. Boyle: Non-instrumented incubation of a recombinase polymerase amplification assay for the rapid and sensitive detection of proviral HIV-1 DNA. In: PloS one. Band 9, Nr. 9, 2014, S. e108189, ISSN 1932-6203, doi:10.1371/journal.pone.0108189, PMID 25264766, PMC 4180440 (freier Volltext).</ref> Analog zur qPCR kann die HDA auch zur Quantifizierung von DNA verwendet werden.<ref name="PMID 15247927" /> Analog zur Multiplex-PCR können mehrere Sequenzen parallel vervielfältigt werden.<ref>V. Doseeva, T. Forbes, J. Wolff, Y. Khripin, D. O’Neil, T. Rothmann, I. Nazarenko: Multiplex isothermal helicase-dependent amplification assay for detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae. In: Diagnostic microbiology and infectious disease. Band 71, Nr. 4, Dezember 2011, ISSN 1879-0070, S. 354–365, doi:10.1016/j.diagmicrobio.2011.08.021, PMID 22000085.</ref>

Alternative Methoden zur Amplifikation von DNA sind z. B. die Polymerasekettenreaktion, die , die , die (LAMP), (NASBA), die (RPA), die (NEAR), die (RCA).<ref>E. C. Oriero, J. Jacobs, J. P. Van Geertruyden, D. Nwakanma, U. D’Alessandro: Molecular-based isothermal tests for field diagnosis of malaria and their potential contribution to malaria elimination. In: The Journal of antimicrobial chemotherapy. [elektronische Veröffentlichung vor dem Druck] September 2014, ISSN 1460-2091, doi:10.1093/jac/dku343, PMID 25223973.</ref> Weitere Nachweisverfahren sind z. B. die (NESA) und (NENNA), , , und (die beiden letzten Methoden nutzen DNAzyme alies Desoxyribozyme), nicht-kovalente DNA-Katalysen und die (HCR).<ref>L. Yan, J. Zhou, Y. Zheng, A. S. Gamson, B. T. Roembke, S. Nakayama, H. O. Sintim: Isothermal amplified detection of DNA and RNA. In: Molecular bioSystems. Band 10, r. 5, Mai 2014, ISSN 1742-2051, S. 970–1003, doi:10.1039/c3mb70304e, PMID 24643211.</ref>

Einzelnachweise

<references> <ref name="Fardeau2004"> Marie-Laure Fardeau, Monica Bonilla Salinas, Stéphane L'Haridon, Christian Jeanthon, Frédéric Verhé, Jean-Luc Cayol, Bharat K. C. Patel, Jean-Louis Garcia, Bernard Ollivier: Isolation from oil reservoirs of novel thermophilic anaerobes phylogenetically related to Thermoanaerobacter subterraneus: reassignment of T. subterraneus, Thermoanaerobacter yonseiensis, Thermoanaerobacter tengcongensis and Carboxydibrachium pacificum to Caldanaerobacter subterraneus gen. nov., sp. nov., comb. nov. as four novel subspecies. In: International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, Band 54, Nr. 2, März 2004, S. 467–474; doi:10.1099/ijs.0.02711-0, PMID 15023962 (englisch). </ref> </references>